分析鼠抗β-內(nèi)酰胺類單克隆抗體的制備流程

　　1、動物免疫將9只雌性Balb/C小鼠分為3組，高、中和低3個劑量組每次免疫分別為200，100和50μg/只。*免疫取相應(yīng)劑量的β-內(nèi)酰胺酶，溶于50μl0.1mol/LTris-HCL（pH7）中，于等體積的弗氏*佐劑充分乳化后小鼠后頸背部多點注射。兩周后使用同劑量免疫原與弗氏不*佐劑乳化作第2次免疫，于腹腔皮下注射。第

　　3次免疫后，ELISA法檢測小鼠抗血清的效價。在3組中選取效價高的小鼠做融合，融合前3d腹腔注射相同劑量的抗原液作加強免疫。

　　2、SP2/0骨髓瘤細胞的培養(yǎng)用8-氮雜鳥嘌呤（20μg/mL）處理3代體外培養(yǎng)的SP2/0骨髓瘤細胞，對數(shù)生長期時皮下注射Balb/C小鼠背部兩側(cè)，每只小鼠注射5×105～1×106個細胞。實體瘤直徑長至2～3cm時，無菌解剖摘取，200目的篩網(wǎng)研磨過濾，重新培養(yǎng)至細胞穩(wěn)定生長。

　　3、細胞融合融合前1d使用鼠培養(yǎng)飼養(yǎng)細胞。取對數(shù)生長期的SP2/0骨髓瘤細胞與免疫小鼠的脾細胞，用50％PEG2000按常規(guī)方法融合，使用建立的青霉素酶間接ELISA法檢測培養(yǎng)上清。選擇強陽性孔，用有限稀釋法連續(xù)亞克隆4～5次，直至克隆孔100％分泌抗β-內(nèi)酰胺酶抗體。將建立的穩(wěn)定、高效價分泌鼠抗β-內(nèi)酰胺類單克隆抗體的雜交瘤細胞株擴增培養(yǎng)，傳3代及凍存復(fù)蘇后仍能穩(wěn)定分泌抗體的雜交瘤細胞株，然后置液氮中保存。

　　4、腹水抗體的制備采用體內(nèi)誘生法制備腹水。取Balb/C小鼠腹腔注射滅菌石蠟油0.5mL/只，兩周后注射抗β-內(nèi)酰胺酶的雜交瘤細胞5×105個/只，1周后收集小鼠腹腔液。

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