解讀鼠抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體的制備方法

　　黃曲霉毒素在自然界分布的黃曲霉中，約有20%的菌株能產(chǎn)生黃曲霉毒素。其中花生、玉米、黃豆及棉籽等作物與其副產(chǎn)品易感染黃曲霉毒素，含黃曲霉毒素量較多，食入后在動物體內(nèi)主要存在于如肝臟、尿與糞便中。黃曲霉毒素是一種肝臟毒素，能引起肝細(xì)胞變質(zhì)、壞死、出血；目前，黃曲霉毒素的酶聯(lián)免疫法，免疫膠體金法等檢測方法均需要黃曲霉毒素抗原抗體。
 

　　黃曲霉毒素B1(AFB1)是具有強致癌性的極毒物質(zhì)。在濕熱條件下，花生、玉米、混合飼料等糧油作物霉變后AFB1的污染頻率較高，是對人類和畜牧危害最大的真菌毒素。該法屬于目測半定量，檢測精度低，而且操作復(fù)雜，需要使用標(biāo)準(zhǔn)品。
 

　　鼠抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體的制備方法：
 

　　(1)黃曲霉毒素半抗原合成
 

　　20-100mg黃曲霉毒素溶于丙酮中，10%硫酸中，于60℃攪拌反應(yīng)，3h后，蒸干丙酮，洗滌4次，蒸干后得到黃曲霉毒素半抗原。
 

　　(2)黃曲霉毒素全抗原(人工抗原、抗原、酶標(biāo)抗原)合成
 

　　將黃曲霉毒素半抗原與牛血清白蛋白偶聯(lián)得到免疫抗原。
 

　　取60mg牛血清白蛋白溶于9.5mlPBS(0.01mol/L,pH5.0)溶液中，加入50微升室溫攪拌1h，用0.01mol/LPBS透析3天，每天換3次透析液，得到黃曲霉毒素與牛血清白蛋白的免疫抗原。