單抗制備-細胞融合篩選過(guò)程中遇到的問(wèn)題及對策

1，融合率低，陽(yáng)性孔少
①免疫的問(wèn)題。由于免疫原性不強或者免疫途徑不當造成免疫弱，效價(jià)低。
②融合過(guò)程中溫度、時(shí)間、PEG分子量，作用時(shí)間等。
③脾細胞是否取出了足夠多的細胞，有無(wú)組織碎片干擾。
④融合前骨髓瘤細胞生長(cháng)狀態(tài)是否完好，細胞是否渾圓，透亮，成對數生長(cháng)。

2，單抗親和力整體低
①免疫的問(wèn)題。免疫途徑不當或者免疫原問(wèn)題。
②融合細胞篩選過(guò)程出現遺漏，篩選方法不當或檢測方法不當，造成沒(méi)有篩到高親和力的融合細胞。
③由于亞克隆細胞生長(cháng)環(huán)境不合適，導致融合細胞染色體丟失，分泌特性改變，親和力從高變低，這時(shí)就需要及時(shí)更換培養液，當細胞增長(cháng)到一定密度的時(shí)候，培養基就開(kāi)始變顏色，影響融合細胞的生長(cháng)，造成染色體丟失；控制好細胞的密度，密度過(guò)大使新加入的培養基不至于很快被消耗，影響融合細胞的生長(cháng)，造成染色體丟失；不要過(guò)于頻繁操作細胞，當細胞生長(cháng)密度不是很大的時(shí)候，不要頻繁操作，否則細胞容易出現死亡或者生長(cháng)形態(tài)發(fā)生明顯變化。
操作細致，防止細胞被支原體等微生物污染。

3，抗體親和力從高變低
①沒(méi)有及時(shí)更換培養液，當細胞增長(cháng)到一定密度的時(shí)候，培養基就開(kāi)始變顏色，影響融合細胞的生長(cháng)，造成染色體丟失或者性狀改變。
②控制好細胞的密度，密度過(guò)大使新加入的培養基不至于很快被消耗，影響融合細胞的生長(cháng)，造成染色體丟失或者性狀改變。
③過(guò)于頻繁操作細胞，當細胞生長(cháng)密度不是很大的時(shí)候，不要頻繁操作，否則細胞容易出現死亡或者生長(cháng)形態(tài)發(fā)生明顯變化。
④細胞被支原體等微生物污染。
⑤亞克隆次數超過(guò)5次，導致細胞生長(cháng)環(huán)境經(jīng)常被改變，弱的陽(yáng)性雜交瘤細胞染色體丟失或者性狀改變。