高親和力單克隆抗體制備問(wèn)題及對策

一、單抗制備-骨髓瘤細胞SP2/0 培養過(guò)程中遇到的問(wèn)題及對策

1，細胞長(cháng)的慢或細胞死亡
正常生長(cháng)情況下，細胞一天傳代一次，生長(cháng)越好，貼壁越多
對策：①培養基配方不對；② 接種密度太低，低于10的4次方；③污染了支原體或者其他不明細菌，支原體的現狀是出現小黑點(diǎn)；細菌污染是渾濁；霉菌污染是出現白色肉眼可見(jiàn)菌落；不明細菌污染出現砂狀平鋪背景，視野發(fā)暗。④細胞瓶刷洗不干凈

2，細胞形態(tài)異常
正常生長(cháng)情況下，細胞渾圓，透亮，成對數生長(cháng)，生長(cháng)越好，貼壁多，懸浮少
對策：①培養基配方不對；② 接種密度太低，低于10的4次方；③污染了支原體或者其他不明細菌，支原體的現狀是出現小黑點(diǎn)；細菌污染是渾濁；霉菌污染是出現白色肉眼可見(jiàn)菌落；不明細菌污染出現砂狀平鋪背景，視野發(fā)暗。④細胞瓶刷洗不干凈

單抗制備-細胞融合篩選過(guò)程中遇到的問(wèn)題及對策

1，融合率低，陽(yáng)性孔少
①免疫的問(wèn)題。由于免疫原性不強或者免疫途徑不當造成免疫弱，效價(jià)低。
②融合過(guò)程中溫度、時(shí)間、PEG分子量，作用時(shí)間等。
③脾細胞是否取出了足夠多的細胞，有無(wú)組織碎片干擾。
④融合前骨髓瘤細胞生長(cháng)狀態(tài)是否完好，細胞是否渾圓，透亮，成對數生長(cháng)。

2，單抗親和力整體低
①免疫的問(wèn)題。免疫途徑不當或者免疫原問(wèn)題。
②融合細胞篩選過(guò)程出現遺漏，篩選方法不當或檢測方法不當，造成沒(méi)有篩到高親和力的融合細胞。
③由于亞克隆細胞生長(cháng)環(huán)境不合適，導致融合細胞染色體丟失，分泌特性改變，親和力從高變低，這時(shí)就需要及時(shí)更換培養液，當細胞增長(cháng)到一定密度的時(shí)候，培養基就開(kāi)始變顏色，影響融合細胞的生長(cháng)，造成染色體丟失；控制好細胞的密度，密度過(guò)大使新加入的培養基不至于很快被消耗，影響融合細胞的生長(cháng)，造成染色體丟失；不要過(guò)于頻繁操作細胞，當細胞生長(cháng)密度不是很大的時(shí)候，不要頻繁操作，否則細胞容易出現死亡或者生長(cháng)形態(tài)發(fā)生明顯變化。
操作細致，防止細胞被支原體等微生物污染。

3，抗體親和力從高變低
①沒(méi)有及時(shí)更換培養液，當細胞增長(cháng)到一定密度的時(shí)候，培養基就開(kāi)始變顏色，影響融合細胞的生長(cháng)，造成染色體丟失或者性狀改變。
②控制好細胞的密度，密度過(guò)大使新加入的培養基不至于很快被消耗，影響融合細胞的生長(cháng)，造成染色體丟失或者性狀改變。
③過(guò)于頻繁操作細胞，當細胞生長(cháng)密度不是很大的時(shí)候，不要頻繁操作，否則細胞容易出現死亡或者生長(cháng)形態(tài)發(fā)生明顯變化。
④細胞被支原體等微生物污染。
⑤亞克隆次數超過(guò)5次，導致細胞生長(cháng)環(huán)境經(jīng)常被改變，弱的陽(yáng)性雜交瘤細胞染色體丟失或者性狀改變。

三、單抗腹水制備過(guò)程中遇到的問(wèn)題及對策
1，腹水少或者無(wú)腹水產(chǎn)生
①致敏不正確，不正確的使用致敏劑，或者致敏時(shí)間與接種雜交瘤的時(shí)間相差太久，一般是7-14天，具體看小鼠的腹部情況。

②雜交瘤細胞或者致敏劑的接種位置不正確，沒(méi)有打到腹腔，而是打到了皮下。

③接種的雜交瘤細胞數量太少，太多或者細胞狀態(tài)不好。一般不50萬(wàn)個(gè)細胞左右為宜。

④建議使用母鼠或者生育過(guò)的母鼠制備腹水。
2，腹水沒(méi)有效價(jià)

①制備腹水的雜交瘤極不穩定，打到小鼠身上之前就失去抗體分泌能力或者打到腹腔內就失去了分泌能力。

② 致敏小鼠時(shí)采用了錯誤的致敏劑。
 ③接種的雜交瘤細胞數量太少，或者細胞狀態(tài)不好。
④ 由于注射方式和部位錯誤，形成了實(shí)體瘤。