免疫親和柱的原理與作用過程

　　一、免疫親和柱(Immunoprecipitationcolumn)是一種常用的實驗技術(shù)，用于從混合物中分離出特定的蛋白質(zhì)或其他分子。免疫親和柱通過利用抗體與特定分子的相互作用來實現(xiàn)選通性緩沖。
 

　　二、作用過程：
 

　　1.制備樣品：將要檢測的生物分子從細胞提取物、組織或其他樣品中提取出來。這個步驟可能需要不同的方法，具體取決于你感興趣的生物分子。
 

　　2.準(zhǔn)備免疫親和柱：選擇一個適當(dāng)?shù)拿庖哂H和柱，然后按照該柱的說明書進行準(zhǔn)備。大多數(shù)免疫親和柱都需要在使用前進行條件化，并且需要用緩沖液洗滌以去除未結(jié)合的成分。
 

　　3.加入樣品：將制備好的樣品加入到免疫親和柱中，使其流過柱。此時，免疫親和柱內(nèi)的抗體將會識別并結(jié)合目標(biāo)蛋白質(zhì)，并將其捕獲到柱內(nèi)。
 

　　4.洗滌柱子：用帶有鹽和洗滌劑的緩沖液洗滌柱子，以去除非特異性結(jié)合，并使免疫親和柱上的目標(biāo)蛋白質(zhì)保持其穩(wěn)定性。
 

　　5.瞬時沉淀：通過在免疫親和柱中加入一個低pH緩沖液，可以使目標(biāo)蛋白從抗體中釋放出來。此時，目標(biāo)蛋白質(zhì)會形成沉淀，并可用于后續(xù)分析。
 

　　6.分析樣品：將瞬時沉淀的樣品用于下一步分析。這可能是Westernblot、質(zhì)譜或其他技術(shù)，具體取決于你要檢測的生物分子。
 

　　三、因為免疫親和柱的高特異性，使用免疫親和柱凈化可以獲得純凈的樣品提取物，如同標(biāo)準(zhǔn)品般純凈的提取物可以用相對簡單常見的檢測方式獲得準(zhǔn)確的定量檢測結(jié)果，這對于微量甚至痕量分析很重要。在樣品凈化過程中，使用親和柱同時避免了常規(guī)液液萃取中大量有機溶劑的使用，加強了對實驗員的保護。