嘔吐毒素免疫親和柱的凈化檢測方法及需要注意的地方

　　嘔吐毒素免疫親和柱測定的原理

　　本產品測定的基礎是抗原抗體反應，抗嘔吐毒素(DON)的單克隆抗體連接在柱內凝膠介質上，樣品中的DON經(jīng)過提取、過濾、稀釋，然后將樣品提取液緩慢通過DON免疫親和柱，在免疫親和柱內，DON與抗體結合，洗滌液通過免疫親和柱除去未被結合的雜質。z后采用甲醇洗脫DON，然后進行相關分析。

　　凈化過程

　　注意：整個純化過程盡量不要讓柱子干燥!

　　3mL柱管取出上方堵頭，減去上堵頭螺紋下突出部分，插回柱子上，另一端與20mL針筒固定后使用;將1mL柱管上方堵頭取出后斜剪斷，然后再插回柱子上(柱管內偶見有小氣泡屬正?，F(xiàn)象，不影響親和柱的使用);

　　準確移取上述混勻濾液，注入針筒中，調節(jié)針筒壓力使其以2秒/滴的速度緩慢通過免疫親和柱;

　　用20mL水沖洗柱子(對于飼料及玉米加工副產品等顏色較深的樣液，先用10mL0.1%吐溫20-PBS清洗，再用10mL10%甲醇-水沖洗柱子，z后用10mL水沖洗柱子。)，流速1秒/滴，棄去流出液，直至2~3mL空氣通過柱體，保證柱子內沒有殘余液體;

　　準確加入1.5mL甲醇(色譜級)洗脫，流速自然重力，直至2~3mL空氣通過柱體，保證柱子內沒有殘余液體。收集全部洗脫液，進行相關測定。

　　嘔吐毒素免疫親和柱的檢測方法

　　IAC-HPLC法檢測

　　過有機濾膜(孔徑0.22μm)后，直接HPLC測定;或在50℃下用氮氣緩緩地吹至近干，加入流動相混勻，過有機濾膜(孔徑0.22μm)后，參照GB5009.111-2016或GB/T30956-2014條件進行HPLC測定。

　　使用注意事項

　　(1)嘔吐毒素對人體有害，應戴手套操作。凡接觸到標樣的玻璃器皿都要用5%次氯酸鈉浸泡過夜。

　　(2)不要使用過有效期的免疫親和柱。

　　(3)免疫親和柱應在2~8℃保存。不要冷凍。

　　(4)使用前，免疫親和柱需至少提前半小時回溫至室溫(25℃左右)。

　　(5)HPLC液相測定值、試劑盒計算值接近z高檢出值時，樣本的實際含量可能大于柱容量而造成流穿，建議減少上樣體積重新過柱。

　　(6)稱取的樣品量以及提取液的體積可根據(jù)實際情況按比例調整，建議z低不少于10g樣。

　　以上便是今天關于嘔吐毒素免疫親和柱的凈化檢測方法及需要注意的地方的全部分享了，希望對大家今后使用本設備能有幫助。